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動物細胞培養中動物血清的作用

更新時間:2022-06-22    點擊次數:1169
   動物細胞培養中動物血清的作用:
  ①提供細胞生存和增殖所必需的生長調節因子。
  ②補充基礎培養基中沒有或量不足的營養成分。
  ③含有一些可供貼壁細胞型細胞貼壁生長的基質成分。
  ④提供載體蛋白,可結合維生素、脂質、金屬離子等。
  ⑤在一些情況下,中和毒性物質保護細胞不受傷害。
  ⑥給培養液提供良好的緩沖系統。
  ⑦提供蛋白酶抑制劑,保護細胞免受死細胞釋放的蛋白酶的傷害。
  但是血清也存在一些弊端,比如存在不少有害成分(補體、免疫球蛋白和一些生長抑制因子等);血清成分不明確,影響對結果的分析;不同動物、不同批次的血清成分和活性有很大不同,使得培養結果不穩定。
  盡管如此,血清仍然是培養液中基本的添加物,尤其是在原代培養或細胞生長狀態不良時,常常會先使用有血清的培養液進行培養,待細胞生長旺盛后再換成無血清培養液。
  血清中含有蛋白質、氨基酸、葡萄糖、激素等,其中蛋白質主要為白蛋白和球蛋白。氨基酸有多種,是細胞合成蛋白質的基本成分,其中有些氨基酸動物細胞本身不能合成(稱為必需氨基酸),必須由培養液提供。血清激素有胰島素、生長激素等及多種生長因子(如表皮生長因子、成纖維細胞生長因子、類胰島素生長因子等);血清還含有多種未知的促細胞生長因子、促貼附因子及其他活性物質,能促進細胞的生長、增殖和貼附。因此,細胞培養時,要保證細胞能夠順利生長和增殖,一般需添加10%~20%的血清,動物血清還可起到酸堿度緩沖液的作用.
  動物血清保存的注意事項:
  一、需要長期保存的血清必須儲存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月.由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發生污染或玻璃瓶凍裂.
  二、熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過程中須規則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質量.補體參與反應有:細胞毒作用, 平滑肌細胞收縮, 肥大細胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進淋巴細胞和巨噬細胞發生化學趨化和活化.
  三、瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝.在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發生.切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現沉淀.
  四、一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌.如發現血清有懸浮物,則可將血清加入培養液內一起過濾,切勿直接過濾血清.
  五、血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質量.可用離心3000rpm, 5分鐘去除,也可不用處理. 顯微鏡下"小黑點":經過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多.有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認為血清受污染.一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質量,則應立即停止使用,更換另一批號的血清.
  六、切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破會而影響血清質量.
 

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