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酶標(biāo)板的分類及選擇!

更新時(shí)間:2022-04-14    點(diǎn)擊次數(shù):2872

  實(shí)驗(yàn)耗材—酶標(biāo)板的分類及選擇


  酶標(biāo)板作為載體的固相聚苯乙烯表面對(duì)抗原、抗體或抗原抗體符合物的吸附起到很重要的作用。在常用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中,參與免疫學(xué)反應(yīng)的抗原、抗體、標(biāo)記抗體或抗原的純度、濃度和比例;緩沖液種類、濃度和離子強(qiáng)度、pH值和反應(yīng)溫度、時(shí)間等條件起著關(guān)鍵作用。

  酶標(biāo)板的分類:

  1、根據(jù)孔數(shù),可分為96孔、48孔,其中96孔是現(xiàn)在的,因?yàn)槊笜?biāo)板就是配合酶標(biāo)儀用,現(xiàn)在的酶標(biāo)儀做出來(lái)的最多的是96孔,所以客戶在購(gòu)買(mǎi)時(shí)也是要96孔板,廠家也為了適應(yīng)市場(chǎng)基本上做出來(lái)的就是96孔的。

  2、根據(jù)顏色又分為透明、黑色、白色。透明的是的,用于最一般的酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)。相對(duì)于透明的的板子,還有用于發(fā)光檢測(cè)用的不透明的板子,一般有黑色和白色兩種。黑色的酶標(biāo)板自身會(huì)有光吸收,所以它的信號(hào)相對(duì)于白色的板子要低很多,因此一般用于檢測(cè)較強(qiáng)的光,如熒光檢測(cè)。而白色的酶標(biāo)板就用于較弱的光檢測(cè),常用于一般的化學(xué)發(fā)光。另外黑色的酶標(biāo)板還可以消弱非特異反應(yīng)帶來(lái)的問(wèn)題。有些客戶會(huì)問(wèn),用一般的酶標(biāo)板可不可以進(jìn)行發(fā)光檢測(cè),回答是不可以的,因?yàn)橐话銖幕瘜W(xué)發(fā)光反應(yīng)中發(fā)射出的光是各向同性的,也就是說(shuō)各個(gè)方向上同等發(fā)射出來(lái)的。如果用透明的板子,光不僅會(huì)從垂直方向發(fā)散,還從水平方向發(fā)散出來(lái)。很容易的就會(huì)通過(guò)各個(gè)孔之間的間隙和孔壁。這樣的話,光較強(qiáng)時(shí)相鄰孔之間的影響就會(huì)很大,因此不能用透明的酶標(biāo)板來(lái)進(jìn)行化學(xué)發(fā)光實(shí)驗(yàn)。

  3、高結(jié)合力酶標(biāo)板:本生生物酶標(biāo)板經(jīng)表面處理后蛋白結(jié)合能力大大增強(qiáng),可達(dá)300~400ngIgG/cm2,主要結(jié)合的蛋白分子量>10kD。使用該類酶標(biāo)板可提高敏感性,并可相對(duì)減少包被蛋白的濃度和用量,不足之處為較易產(chǎn)生非特異性反應(yīng)。抗原或抗體包被后,以非離子去污劑無(wú)法有效地封閉未結(jié)合蛋白的部位,需使用蛋白作為封閉劑。

  4、中結(jié)合力酶標(biāo)板:酶標(biāo)板經(jīng)表面疏水鍵被動(dòng)與蛋白結(jié)合,適合作為分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體,其蛋白結(jié)合能力為200~300ngIgG/cm2。由于該類酶標(biāo)板所具有的僅與大分子結(jié)合的特性,適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體,可降低潛在的特異性交叉反應(yīng)。該類板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液。

  5、氨基化酶標(biāo)板:本生生物酶標(biāo)板經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基,其疏水鍵由親水鍵取代。該類酶標(biāo)板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和pH值,其表面可通過(guò)離子鍵與帶負(fù)電荷的小分子結(jié)合。由于其表面的親水特性和可通過(guò)其它交聯(lián)劑共價(jià)結(jié)合的能力,可用于固定溶于Triton-100、Tween20等去污劑的蛋白分子。該類板的缺陷為由于降低了疏水性,一部分蛋白分子無(wú)法結(jié)合;此外,其表面需有效地封閉。由于親水和共價(jià)的表面特性,使用的封閉液必須能夠與非反應(yīng)性氨基基團(tuán)和所選擇的交聯(lián)劑中任何功能基團(tuán)發(fā)生作用。

  酶標(biāo)板的選擇:

  根據(jù)底部不同,酶標(biāo)板可分為平底、U型底平底、V型底三類。平底:底部讀數(shù)平板與細(xì)胞培養(yǎng)用,折光率較低,適合用于上酶標(biāo)儀讀數(shù)。U型底:折光率較高,方便加樣、吸樣、混勻等操作, 也適用于不需上機(jī)讀數(shù)、直接通過(guò)目測(cè)顏色深淺,可用于凝集。V型底:精確吸取樣品和儲(chǔ)存樣品。

 

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